IHC studija - pomoć u dešifrovanje biologije raka dojke

Uprkos činjenici da sve više i više klinika počinju da koriste tehnike genetskog fenotipskih tumora IHC studija se i danas glavno sredstvo u dešifrovanje biologije raka dojke, u predviđanju svoj budući razvoj ", prediktor" odgovora tumora na planirane tretman.

U ovom članku ćete naučiti kako imunohistohemijskom (IHC) studija, značaj IHC ima rak dojke.

Histohemiji (sekcija u histologiju bojenje)

Prije nego što patolog (morfologija) počinje pod mikroskopom dio tkiva dojke dobijenih od biopsije, potrebno je ofarbao posebne boje.

Histohemijska boje nanosi na tanak odjeljak web-lokacije tkiva da vidi pod mikroskopom, ćelije koje su prisutni, njihov raspored u odnosu na druge (struktura tkiva). Svjetlosnim mikroskopom je rutinska metoda za proučavanje sekcije bojeni tkiva, naširoko koristi u dijagnostici raka dojke. Najčešći sekcije bojenje tkiva koristeći:

• Hematoksilin - to mrlje jezgro ćelije u tamno plave boje;
• Eozin - izrada roze citoplazmi stanica. Dijeljenje ih sa hematoksilin-eozin zove bojenje.

Ono što je imunohistohemijski (IHC)

Patolog - doktor, koji je dugo studirao na Medicinskom fakultetu, da znaju kako se koristi mikroskop razlikovati obojenog ćelije sekcije raka od normalnog tkiva. Obično dijagnoza (benigni ili maligni patologija) dovoljno je uzeti u obzir pod sekcije tkiva mikroskop obojeni hematoksilin eozin. Ali ponekad to nije dovoljno. U ovoj situaciji, pomoć dolazi imunohistohemijski, što je morfološka identifikacija ćelija i tkiva dodaje imunološki komponentu.

Način imunohistohemijski (IHC) otkrivanje morfoloških dopune ćelija i tkiva pomoću antitijela na poznate antigene koji su specifični za pojedine vrste ćelije ili ćelijske komponente. Lokacija ovih antitijela se može vidjeti pomoću svjetlosnog mikroskopa, jer antitela čine vizuelno-prepoznaju oznaku.

Prva tehnika imunohistohemijske analiza raka dojke pomoću protutijela s pričvršćenim fluorescentne oznake, što je zahtijevalo korištenje posebnih fluorescentnih mikroskopa, omogućavajući lokalizacija ovih antitijela vidi rez u tkivu dojke.

U proteklih 30 godina značajno pojednostaviti tehnika koja se koristi za istraživanje IHC raka dojke kroz upotrebu specifičnih antitijela (monoklonska antitijela) sa etiketom enzimskih. To je, pak, dozvoljena upotreba svjetlosnim mikroskopom sa istraživačkim immunohistological raka dojke, koji je mnogo jeftiniji i samim tim pristupačniji. Međutim, radioaktivnih elemenata (peroksidaze, alkalna fosfataza, i floresceinom), bez kojih ponekad ne zahtijevaju posebne tehnike i dalje u širokoj upotrebi.

Nužnost korištenja imunohistohemijski kod raka dojke, kontrolirati svoju kvalitetu i tumačenje rezultata treba pratiti odjel patologije. Važno je da su podaci dobijeni na dekodiranje IHC studija koristiti samo u kombinaciji sa morfološkim analizom tkiva dojke, dobiveni bojanje sa hematoksilin eozin.

Danas imunohistohemijski kod raka dojke je najviše rutinska metoda u morfološkim (patohistološka) laboratorija i koristi se za dijagnozu i prognostičke svrhe, kao prediktivni (intuitivni) pokazivač ponašati kao rak dojke u budućnosti.

Dijagnoza raka dojke i IHC

Kada je patolog vidi pod mikroskopom biopsija materijal, on se suočava sa dvije osnovne dijagnostičke zadataka: utvrditi poreklo tumorskih ćelija, gdje su (u kanalima, u lobulama, ili u drugim dijelovima dojke) i potvrditi ili odbaciti njihove invazije okolnih tkiva.

Dijagnostički IHC markeri za rak dojke

Od prvog dana korištenja u onkologiji IHC je provedena u potragu za novim i poboljšanim tehnikama koristiti postojeće antitijela koja bi mogla identificirati ćelije antigeni visoku specifičnost i osjetljivost. Slijedeće IHC markeri su sada široko koristi da razjasni patohistološke dijagnoze raka dojke:

citokeratine

• CK5, CK10, CK14 i CK17 su citokeratin bazalnom sloju epitela, mioepitelnih ćelije izražena.
• CK5 / 6 ili "bazalne citokeratine" pomoći u identifikaciji normalne dojke mioepitelnih ćelija, kao i od mirnih (luči).
• 34 12: antitela pomaže da se prepoznaju citokeratine 1, 5, 10 i 14.

Markeri glatkih mišića

• H-caldesmon. To se može naći samo u dojke duktalni mioepitelnih ćelije, tako da ima visoku specifičnost.
• Glatkih mišića aktin (SMA). Ova antitijela pomaže da se otkrije aktin u mikrofilamentah- malu specifičnost, jer se otkrije SMA u fibroblasta (u tkivima koja su regenerisati).
• Miozin teškog lanca glatkih mišića (SMMHC) - strukturna komponenta u glatkog mišića miozin izoforme SM2. Izraženo mioepitelnih ćelije dojke, ima visoku osjetljivost i specifičnost, kao SMMHC prisutan samo u mioepitelnih ćelijama raspoređeni u kanalima i lobulama od mliječne žlijezde, ali ne u fibroblasta vezivnog tkiva žlijezde.
• Calponin - polipeptid od 34 kDa, modulira aktivnost actomyosin. Dobra osjetljivost, ali je prisutna u mlečne fibroblasta vezivnog tkiva.
• P63-p53 homolog - nuklearna marker je vrlo osjetljivo mioepitelnih ćelija.
• CALLA: Endopeptid, koja se izražava u mioepitelnih ćelija.
• P-cadherin - ćelija prianjanje molekula uz veliku osjetljivost na mioepitelnih ćelije normalnog tkiva dojke. To ne reaguje sa fibroblaste.

drugi markeri

• E-kadherina - ćelija prianjanje molekula. Ona se koristi za razlikovanje duktalni karcinom "u suti" (DCIS) u lobularna. Karcinom "u suti" (LCIS) - DCIS, obično identifikovao bojenja membrane, za razliku od LCIS, u kojima nije.
• markeri melanoma: S100, Melan-A, HMB45.
• limfocita markera: CD20, LCA, CD15, CD30.
• vaskularne endotelne markera: CD31, CD34, Faktor VIII, D2-40 (podoplanin).
• proliferaciju markera: Ki67, MIB-1, PPh3.
• apoptoze markera: Bcl-2 i Bax, Bcl-X.

Primjeri korištenja IHC riješiti probleme u određivanju patologije dojke

Postoje mnoge situacije u kojima imunohistohemijski doprinosi formulacija konačnog patohistološke dijagnoze u patologije dojke:

• Bojenje e-kadherina ćelijske membrane eliminira lobularna neoplazija (ALH) i LCIS. Nedostatak bojenja ćelijske membrane pogoduje lobularna tumora.
• Normalno epitelne hiperplazije, epitelne atipije ili ovo ili ono DCIS. U benigna hiperplazija može otkriti reaktivnost na CK5 / 6 i CK14, dok je kod atipične hiperplazije i DCIS ne.

Ovaj mikro-invazivni karcinom ili nešto drugo? Primjena mioepitelnih ćelija markera je ključno u određivanju da li ili ne mikro-karcinom invazije (invazije na laminarnog sloja u mioepitelnih ćelija). Reaktivnost fibroblasta, jaz u bojenje ćelija, mioepitelnih bojenje vaskularnih glatkih mišićnih ćelija može uzrokovati poteškoće u tumačenju posmatrane obrazac pod mikroskopom. Dva markera mioepitelnih ćelija koje se koriste u ovoj situaciji, na primjer, P63 i SMMHC, ili ASMA, ili calponin.

Šta IHC markeri se koriste u dijagnostici panela u patologiji dojke

Skup markera (dijagnostičkih panel), koji se koristi u IHC studije raka dojke, u velikoj mjeri ovisi o opremljenosti laboratorija u kojem se sprovode imunohistohemijski, i iskustvo liječnika vođenja to. U nastavku su preporuke koje IHC panela treba koristiti kada patologije dojke, pod uslovom da jedan od klinika:

• Miozin teškim lancima glatkih mišića (SMMHC) ili calponin - osjetljive i specifične markere u citoplazmi mioepitelnih ćelije;
• Glatkih mišića aktin se može koristiti, ali i dalje u tumačenju treba imati na umu da je prisutan u fibroblasta (upala i ožiljak);
• P63 je osjetljiv i specifičan marker na jedra mioepitelnih ćelije bojenje, ali može biti diskontinuiran. Upotreba marker na citoplazmi mioepitelnih ćelije, kao što su SMMHC ili calponin, treba koristiti kako bi izbjegli bilo kakve probleme u tumačenju slike dobiti.

Prilikom pokušaja da se utvrdi prisutnost ili odsutnost mioepitelnih ćelija i P63 treba koristiti SMMHC, ili calponin.

Uloga imunohistohemijski u definiciji "budućnost" i "intuitivni" faktora kod raka dojke

Prognostički faktori pružaju informacije o mogućem ponašanju raka dojke u vrijeme dijagnoze i nezavisni terapije. To je, uz pomoć njih možete prosuditi kako će brzo napredovati i raka, odnosno, ovisno o tome odlučiti koliko i tretman prednost u svakoj situaciji.

S druge strane, "intuitivni" (predvidjeti) faktori pružaju informacije koje daje naznaku vjerojatnost odgovora tumora na određenu terapiju. Uprkos činjenici da prognostičke i prediktivne faktori mogu organizirati odvojeno u dijagnostici i klasifikaciji raka dojke češće su i prognostičke i prediktivne.

Na primjer, prisustvu visokih HER2 izražavanja. Ako HER2 rak dojke pozitivan (veliki broj HER2 proteina u tumor), potrebno je agresivan, s početkom metastaze na udaljene organe. Ali, ako je tumor sadrži malu količinu ovog proteina (rak dojke HER2 negativan), neće odgovoriti na upotrebu ciljanog droge Herceptin.

"Bazalni" IHC markera

Postoji podjela Rak dojke ovisno o tome koji su geni izrazi svoje ćelije (gen profil izraz). Tumori profil koji je karakterističan za bazalne ili mioepitelnih ćelije normalne dojke, će pokazati prisutnost "bazalni" markera. Takvi tumori imaju lošu prognozu. U većini ovih "bazalne" tumora potpuno odsutna ER, PR (receptore za estrogen i progesteron) i HER2 proteina. Oni često metastazira na mozak, pluća.

Danas ne postoji konsenzus o imunohistohemijskom profil (IHC markeri koje treba primijeniti), koji bi jasno definirati "bazalni" rakovi. Ovi tumori s lošom prognozom uključuje takozvani "triple negativne raka dojke", u kojem ne ER, PR i HER2, ali je izrazio bazalni citokeratine 5/6 i 14, na receptor epidermalnog faktora rasta (EGFR) i C-KIT. Oni također mogu izraziti P-kadherina i često P63.

Postoje sličnosti između "bazalni" raka dojke i raka koje su otkrivene u žena s BRCA1 mutacijom.

EGFR je često u "bazalni" rak izrazili toliko pacijenata s takvim tumori mogu imati koristi u liječenju EGFR inhibitora.

IHC markera proliferacije (tumora stopa rasta)

Broj ili procenat mitotsku ćelija u mitozi, već dugo smatra morfološki "biomarkera" prognozu raka. Postoji veliki broj IHC markera koji pokazuju proliferativna aktivnost ćelija (broj mitoza):

• Ki67 - antigen koji se izražava u jedra ćelija u svim fazama staničnog ciklusa i koristan marker proliferaciju;
• MIB1 - antitela koja reagira s Ki-67 u tkivu, ili formalin-fiksna parafin;
• PPh3.

IHC markeri apoptoze

Apoptoze ili "programirane ćelije samoubistvo" je biomarker agresivne tumore. apoptoze proteini se mogu prepoznati po IHC:

• Bcl-2;
• Bax;
• Bcl-X.

Ostali "budućnost" markera

• p53. Mutacije u tumor supresor gena p53 (TP53) otkrivene u 20-30% slučajeva raka dojke. Ove mutacije gena su češći kod žena s nasljednim sindromima raka dojke u odnosu na žene s rakom sporadično. Za pacijente sa genetskom predispozicijom za rak dojke može se preporučiti testiranje p53. Otkrivanje mutacija u p53 se smatra kao mogući prediktor odgovor raka dojke na hemoterapiju, ali otkrivanje p53 proteina imunohistohemijski tumora ne odražava status p53 mutacija.
• Topoizomeraze II-alfa. To je meta na koju se akcija usmjerena antraciklina - hemoterapeutik lijek koji se često koristi u liječenju raka dojke.